T/WSJD 57-2024 食品中蜡样芽胞杆菌呕吐毒素的测定
《T/WSJD 57-2024 食品中蜡样芽胞杆菌呕吐毒素的测定》是由中国卫生监督协会于2024年3月11日发布,并于2024年3月26日正式实施的一项团体标准。
蜡样芽胞杆菌呕吐毒素(Cereulide)是一种由蜡样芽孢杆菌产生的耐热、耐酸的毒素,常规加热无法破坏,易污染米饭、面条等淀粉类熟食及乳制品,导致食物中毒。
(一)面米制品
这是淀粉类熟食的典型代表,例如米饭、面条、米粉、糕点等;
(二)乳及乳制品
包括液态乳、奶粉(特别提及婴儿配方奶粉)、奶酪等;
(三)食物中毒呕吐物
在发生食物中毒事件时,对食物中毒呕吐物中蜡样芽胞杆菌呕吐毒素的测定 ,为食品安全事件的病因溯源和应急处置提供了关键的检测依据。
该标准采用同位素稀释内标法进行定量,核心技术路线分为三步:
(一)提取:试样中的呕吐毒素经乙腈提取;
(二)净化:提取液通过固相萃取柱(SPE) 进行净化,通常使用HLB亲水亲脂平衡柱;
(三)检测:净化后的样液注入超高效液相色谱-串联质谱仪(UPLC-MS/MS) 进行测定,通过与加入的内标物信号比对计算含量。
根据标准配套的实验方案,主要操作步骤如下:
(一)样品前处理(以奶粉为例)
1.称量:称取1g(精确至0.01g)均质后的样品;
2.加标:加入内标工作液,静置30分钟;
3.提取:加入5.0mL乙腈,涡旋混匀后超声提取30分钟;
4.离心:在4℃下以12000r/min离心10分钟,取上清液;
5.稀释:上清液中加入5.0mL水混匀,准备过柱。
(二)固相萃取净化
1.活化:使用甲醇和水活化HLB固相萃取柱;
2.上样与淋洗:将稀释后的样液通过柱子,用水和80%甲醇溶液淋洗去除杂质;
3.洗脱:使用乙腈-甲醇混合溶液洗脱毒素;
4.浓缩定容:洗脱液在40℃下氮气吹干,用乙腈复溶,过0.22µm滤膜后上机。
(三)仪器条件
1.色谱柱:使用C18柱,如Shim-pack Scepter C18-300(1.9μm,2.1×100mm);
2.流动相:通常为含0.1%甲酸和2mmol/L乙酸铵的水溶液与含0.1%甲酸的乙腈溶液,进行梯度洗脱;
3.质谱:采用电喷雾离子源(ESI),正离子扫描,多反应监测(MRM)模式检测。


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